На заседании Ученого совета института заслушан и обсужден научный доклад руководителя лаборатории молекулярной биотехнологии, доктора биологических наук, профессора Б.С.Народицкого "ДНК-технологии для создания генно-инженерных препаратов против вирусных и бактериальных инфекций".
В докладе отмечено, что ДНК-технологии (технологии рекомбинантных ДНК) включают следующие методы: выделения генов, клонирования ДНК, идентификации генов, секвенирования ДНК, синтеза олигенуклеотидов (генов), оптимизации экспрессии клонированных генов, введения рекомбинантной ДНК в клетки in vitro и in vivo.
ДНК-технологии используются для непосредственного изучения генетического материала про- и эукариот, а также контролируемой и целенаправленной перестройки ДНК.
Использование технологий рекомбинантных ДНК для переноса фрагментов генома одного организма в другой составляет методическую основу молекулярной биотехнологии.
Одной из основных задач, для решения которой привлекаются ДНК-технологии, является разработка генно-инженерных вакцин, в том числе живых (рекомбинантные вирусы, экспрессирующие протективные антигены других патогенов) и ДНК вакцин.
ДНК-вакцины имеют ряд существенных преимуществ.
• Малозатратные технологии получения и очистки.
• Стабильность при хранении.
• Хорошая переносимость.
• Безопасность (не интегрируют в клеточный геном, не вызывают аутоиммуных реакций).
• Создание сильного CD4+-клеточного ответа и CD8+-цитотоксического ответа.
• Особенно перспективны для борьбы с внутриклеточными инфекциями.
• Имеют хорошие перспективы применения при онкологических заболеваниях.
В лаборатории молекулярной биотехнологии НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН планируются работы по созданию ДНК-вакцин против M.tuberculosis. Будут сконструированы рекомбинантные плазмиды, экспрессирующие различные антигены M.tuberculosis (A85, ESAT, p38 и другие), отработаны оптимальные методы введения рекомбинантных плазмид в организм лабораторных животных и определена их протективность.
Одновременно для создания живых генно-инженерных вакцин будет использована векторная система на основе аденовируса птиц CELO. Эта векторная система имеет ряд преимуществ по сравнению с векторами на основе аденовируса человека.
• Иммунная система человека не сенсибилизирована к вирусу CELO.
• Вирус CELO репликативно дефектен в клетках млекопитающих.
• Вирус CELO способен давать высокие титры при культивировании в курином эмбрионе (до 1012 физических частиц вируса с одного эмбриона).
Сегодня в лаборатории ведутся работы по получению рекомбинантных аденовирусов, экспрессирующих антигены M.tuberculosis и G антиген вируса бешенства. Отрабатывается технология получения терапевтических противовирусных препаратов на основе рекомбинантного аденовируса CELO, экспрессирующего гены интерлейкинов или интерферонов. Разрабатываются методы накопления и очистки биологически активных рекомбинантных белков (цитокины, интерфероны и друриге) в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов, зараженных рекомбинантным аденовирусом CELO, несущим соответствующий целевой ген.