На заседании Диссертационного совета Д 001.007.01 защищена диссертация Ю.С.Аляпкиной "Некультивируемые формы бактерий: выявление и изучение экспрессии генов с помощью количественного варианта полимеразной цепной реакции", представленная на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.07 - микробиология.
Работа выполнена в НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН.
Научные руководители: член-корреспондент РАМН А.Л.Гинцбург и доктор биологических наук Ю.М.Романова.
Официальными оппонентами выступили: член-корреспондент РАМН Г.Б.Смирнов и профессор А.Н.Куличенко.
Ведущая организация - Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова.
В заключении Диссертационного совета отмечено, что работа Ю.С.Аляпкиной посвящена разработке методических подходов для выявления некультивируемых форм патогенных бактерий и количественной оценки экспрессии генов в процессе перехода и поддержания некультивируемого состояния. Она является научным квалификационным исследованием, в котором получены приоритетные экспериментальные данные, подтверждающие на молекулярном уровне существование патогенных бактерий в неактивном состоянии с сохранением жизнеспособности за счет экспрессии некоторых генов в некультивируемых формах.
В ходе исследования разработаны два варианта количественного анализа результатов ПЦР, основанные на иммобилизации ПЦР-продуктов на твердом носителе с последующим количественным определением иммобилизованного материала, которые могут быть использованы для идентификации бактерий в образцах любой природы. Разработанные методы включают: введение молекулярной метки в амплифицированный фрагмент, специфическое связывание амплифицированного фрагмента с целью отделения его от компонентов реакционной смеси, количественную детекцию метки.
Использование разработанных автором методов позволило на моделях Yersinia pseudotuberculosis и Salmonella typhimurium количественно оценить динамику перехода патогенных бактерий в некультивируемое состояние в условиях, воспроизводящих природные.
На основе последовательных реакций обратной транскрипции и разработанного количественного варианта ПЦР предложен методический подход, дающий возможность количественно оценивать экспрессию генов в процессе перехода и пребывания бактерий в некультивируемом состоянии. На примере Salmonella typhimurium впервые показано, что поддержание жизнеспособности бактерий в некультивируемом состоянии обеспечивается за счет дифференцированной экспрессии генетического материала.